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常見問題

BiFC結(jié)果無信號(hào)或信號(hào)弱可能的原因是什么?怎么解決?

文字:[大][中][小] 手機(jī)頁面二維碼 2025/3/11     瀏覽次數(shù):    


答:可能的原因有多種。首先,確認(rèn)載體是否有問題,熒光蛋白選擇是否合適,融合蛋白設(shè)計(jì)有無缺陷,甚至可以對(duì)調(diào)N端和C端的目的基因。其次,有些基因表達(dá)時(shí)間長,在原生質(zhì)體中表達(dá)不明顯,可以嘗試在煙草體系中表達(dá),且適當(dāng)調(diào)節(jié)觀察時(shí)間,以便觀察到更明顯的結(jié)果。同時(shí),確定激光共聚焦顯微鏡觀察是否有失誤。此外,煙草狀態(tài)不佳也可導(dǎo)致農(nóng)桿菌侵染效率低,蛋白表達(dá)弱,進(jìn)而影響熒光信號(hào)。浦芥生物常年供應(yīng)煙草活體苗,可聯(lián)系相關(guān)負(fù)責(zé)人15301627726索取。

針對(duì)無信號(hào)的情況解決方法有:① 建議優(yōu)化、升級(jí)載體系統(tǒng),并檢查融合蛋白的表達(dá)情況;② 優(yōu)化、調(diào)整實(shí)驗(yàn)體系,延長培養(yǎng)時(shí)間,增加菌液濃度,提高乙酰丁香酮用量。③ 在制片過程中,應(yīng)徹底清理干凈葉片表面雜質(zhì),排除氣泡,以減少背景干擾。④ 適當(dāng)調(diào)節(jié)觀察時(shí)間,分時(shí)段檢測(24h/48h/72h),弱表達(dá)蛋白需延長至96小時(shí)。?如果以上原因都已驗(yàn)證排除,還是沒有熒光信號(hào),可能是所研究的蛋白質(zhì)之間確實(shí)不存在相互作用,因此無法形成完整的熒光蛋白。


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